DESAIN, OPTIMASI, DAN KLONING GEN PRETROMBIN-2 SINTETIK UNTUK PRODUKSI TROMBIN SEBAGAI KOMPONEN LEM FIBRIN

Jurnal ITEKIMA

ISSN: 2548-947x

Vol.1, No.1, Februari 2017

DESAIN, OPTIMASI, DAN KLONING GEN PRETROMBIN-2 SINTETIK UNTUK PRODUKSI TROMBIN SEBAGAI KOMPONEN LEM FIBRIN

(Design, Optimization, and Cloning Of PRETOMBIN-2 for Production Thrombin of Fibrin Glue Component)

 

Saronom Silaban1; Iman Permana Maksum2; Shabarni Gaffar2; Sutarya Enus3; Khomaini Hasan4; Toto Subroto2 dan Soetijoso Soemitro2  

1Jurusan Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Negeri Medan, Medan

 2Departemen Kimia, Fakultas MIPA, Universitas Padjadjaran, Sumedang

3Pusat Mata Nasional, Rumah Sakit Mata Cicendo, Bandung

4Pusat Penelitian Pangan, Kesehatan dan Obat, Institut Teknologi Bandung, Bandung

Email/telp: saronomsilaban@unimed.ac.id/085317692813

 

ABSTRAK

Lem fibrin adalah biomaterial perekat yang dapat diaplikasikan untuk mengganti teknik jahitan pasca operasi. Biomaterial ini terdiri atas trombin, fibrinogen dan faktor XIII sebagai komponen utamanya. Dalam kajian ini, didesain dan dilakukan kloning gen pretrombin-2 (PT2) manusia sintetik sebagai prekursor trombin. Gen PT2 pada posisi C-terminal difusikan dengan suatu pengkode intein diikuti oleh gen domain pengikat kitin, yang bermanfaat dalam proses pemurnian. Kodon PT2 dirancang sesuai dengan preferensi kodon Escherichia coli. Gen PT2 dirancang menggunakan perangkat lunak OPTIMIZER dengan penambahan sisi restriksi NdeI pada ujung 5’ dan XhoI pada ujung 3’ nya. Gen PT2 sintetik yang terdapat pada pMAT, dipotong menggunakan enzim restriksi NdeI dan XhoI. Selanjutnya, PT2 diligasi ke vektor ekspresi pTWIN1, yang telah dipotong dengan menggunakan enzim restriksi yang sama, dengan katalis T4 DNA ligase. Keberhasilan kloning PT2 ke pTWIN1 diverifikasi dengan sequensing DNA. Hasil sequensing menunjukkan bahwa gen PT2 hasil rancangan berhasil dikloning ke dalam pTWIN1. Selanjutnya, gen PT2 hasil kloning ini dapat digunakan sebagai bahan awal untuk ekspresi PT2 dalam inang E. coli.

Kata kunci: lem fibrin, trombin, intein, ekspresi, E. coli

 

ABSTRACT

Fibrin glue is a biomaterial adhesive that can be applied as a substitute postoperative suture technique. These biomaterials consisting of thrombin, fibrinogen and factor XIII as main component. In this study, we designed and cloned genes prethrombin-2 (PT2) synthetic humans as a precursor of thrombin. PT2 gene at position C-terminal fused with a gene encoding the intein followed by a chitin-binding domain, which is useful in the purification process. Codon PT2 is designed according to the preference codons of Escherichia coli. PT2 gene was designed using the software OPTIMIZER with the addition of the NdeI restriction on the 5 ‘end and XhoI on the 3’ end of her. PT2 synthetic gene contained in pMAT, cut using restriction enzymes NdeI and XhoI. Furthermore, PT2 pTWIN1 ligated into the expression vector, which has been cut using the same restriction enzymes, the catalysts T4 DNA ligase. The success of cloning PT2 to pTWIN1 verified by DNA sequensing. Sequensing results showed that the gene was successfully cloned PT2 design results in pTWIN1. Furthermore, PT2 cloned gene can be used as starting materials for PT2 expression in E. coli host.

Key words: fibrin glue, thrombin, intein, expression, E. coli

 

Tautan:

08 ITEKIMA_UNM_Silaban

 

Tinggalkan Balasan

Alamat surel Anda tidak akan dipublikasikan. Ruas yang wajib ditandai *